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杜鵑花組織培養(yǎng)技術

畜牧家禽網  來源:互聯(lián)網 閱讀數(shù):

    杜鵑花為杜鵑花科杜鵑花屬常綠或落葉小灌木,具有品種多、開花早、花色豐富、花期長等特點。近幾年,由于扦插繁殖技術的發(fā)展,我國杜鵑花產量有了提高。但是,名貴品種因母本少、繁殖系數(shù)低,仍不能滿足社會需要。而組織培養(yǎng)正是實現(xiàn)杜鵑花工廠化育苗的有效措施。下面將其簡單介紹如下:
    一、杜鵑花組培的基本技術環(huán)節(jié)
    杜鵑花組織培養(yǎng),通常使用的外植體為莖尖、莖節(jié)和花蕾等。因花蕾的分化較為困難,周期長;莖尖的取材受到一定限制,故國內多采用莖節(jié)為初代培養(yǎng)的外植體。
    殺菌處理時,殺菌能力較強的升汞(氯化汞)易造成外植體材料的褐變死亡,不宜使用。試驗表明,采用飽和的次氯酸鈣液上清液或5%的次氯酸鈉液作為滅菌劑,效果較好,處理時間為15至20分鐘。為加強滅菌效果,還可加入1%的克菌丹或0.1%的吐溫-20(山梨糖醇)配合使用。材料滅菌前的預處理,通常采用70%酒精浸泡,不超過30秒。此外,用中性洗滌劑進行材料的預處理,亦可有效降低其滅菌后的污染率。外植材料滅菌流程為:洗衣粉液浸泡20分鐘?流水沖洗至清?70%酒精浸泡30秒?滅菌水沖洗1分鐘?5%次氯酸鈉浸泡15分鐘?滅菌水漂洗3次,每次1分鐘。如此,可將外植體污染率降低到15%以下。
     杜鵑花組培所用培養(yǎng)基,為Andeson改良MS培養(yǎng)基:將MS培養(yǎng)基中的硝酸銨和硝酸鉀用量分別減至1/4,取消了碘化鉀成分,鐵鹽的用量增加一倍。因杜鵑花科植物原產于高山酸性土壤,培養(yǎng)基的pH值宜為5.0至5.4。培養(yǎng)室溫度25℃,光照強度3000勒克斯,光照時間12至14小時。
     杜鵑花在誘芽培養(yǎng)中使用的激素較一般植物有異,需要活性較強的細胞激動素類物質,才能達到滿意的效果。試驗表明,使用ZT的誘芽效應最為顯著;添加KT的處理幾乎無叢芽或側芽發(fā)生,僅是原莖尖的伸長;而選用6-BA處理,則導致培養(yǎng)材料的褐變加劇,效果反不如對照。此外,在其后的增殖培養(yǎng)中,杜鵑花對細胞激動素種類的要求,仍以添加ZT為好。
      國外在杜鵑花的組培中多使用2ip作為外源細胞激動素,效果較ZT好。但從經濟的角度考慮,仍推薦使用ZT。
      二、杜鵑花的初代和繼代增殖培養(yǎng)
杜鵑花初代誘芽培養(yǎng),NAA濃度不得超過0.1mg/L,ZT用量的增大對誘芽效應有明顯促進作用。但提高ZT濃度時,NAA濃度不宜同步增加,ZT/NAA值較大為好。從經濟培養(yǎng)的意義出發(fā),初代培養(yǎng)的激素配比以ZT5+NAA0.01(mg/L)為宜,培養(yǎng)1個月左右時,誘芽率即可達100%,誘芽系數(shù)6.5。
     杜鵑花繼代增殖培養(yǎng),對細胞激動素要求比初代培養(yǎng)有所下降。雖然增殖效應仍隨ZT用量的增加而上升,但已不如初代培養(yǎng)時那么明顯。此外,用于增殖培養(yǎng)的材料性質不同,其增殖效應也不盡相同,品種間亦存在顯著的差異性。供試品種中,‘小桃紅’以采用叢芽為增殖培養(yǎng)體時的增殖系數(shù)較高(7.6);而‘花春雨’則反之,以取用芽條時的反應為佳(7.5)。
      杜鵑花組織培養(yǎng),從接種到誘芽產生,所需的時間明顯長于月季和菊花等,故其繼代增殖培養(yǎng)的周期也較長。試驗中分別以30天和45天為培養(yǎng)周期進行了統(tǒng)計,在各激素水平配比處理中,其增殖芽總數(shù),培養(yǎng)45天要比培養(yǎng)30天的高出50%至80%。所以,杜鵑花組培過程中,過于頻繁地切割、轉換培養(yǎng),反達不到快繁的目的。
      三、試管苗的生根培養(yǎng)及移栽
     杜鵑花的生根培養(yǎng)雖不十分困難,但對培養(yǎng)基的要求仍與一般植物不同。其一,基本培養(yǎng)中無機鹽大量元素的用量不能減半;其二,蔗糖的用量仍為30g/L,生長素NAA的添加量以1.5至2.0mg/L為好,培養(yǎng)45天時的生根率為60%左右。
     供生根培養(yǎng)的試管苗,要求高15厘米以上,具7片以上真葉,發(fā)育健壯。生根培養(yǎng)2周后始見發(fā)根,6周時達最高生根率。試驗中曾發(fā)現(xiàn),在增殖培養(yǎng)過程中用KT或6-BA取代ZT時,雖誘芽、增殖效應較差,但芽條發(fā)育較粗壯。因此,在增殖培養(yǎng)達到一定群體數(shù)量后,用KT或6?BA進行繼代培養(yǎng)處理,可使生根率和移栽成活率明顯提高。此外,在生根培養(yǎng)基中添加2g/L的活性炭,可使試管苗個體發(fā)育顯著增強,1個月后生根率可達到90%以上。
國外的研究資料表明,某些常規(guī)繁殖(扦插)極難生根的植物,經組織培養(yǎng)后獲得的試管苗,生根會容易很多。有些可不經生根培養(yǎng)直接移植到生根介質中,生根率可達100%,3至4周后即可移入溫室進行盆栽。這種生根介質為泥炭土、蛭石、珍珠巖的混合物,pH以4至4.5為宜。
     生根試管苗的移栽入土,栽培基質為1∶1的泥炭生+蛭石混合物。表層要求過篩,以利根系附著;下層鋪粗粒,以利基質滲水。移栽時用鑷子去掉根部附著的培養(yǎng)基(不可損傷根系)。用鑷尖將基質撥一小洞,把根系放入,覆土,輕輕壓實,澆足水。試管苗移栽成活的關鍵是保證一定的溫、濕條件,移栽環(huán)境和試管培養(yǎng)時的條件相差懸殊,常造成移栽苗生長不適或死亡。
試管生根苗的移栽雖然在全年均可進行,但在不具備生根室的情況下,仍以春、秋兩季進行較為穩(wěn)妥方便。
      四、組培技術在杜鵑花新品種選育中的應用
試驗初期,鑒于杜鵑花外植體滅菌困難,可供試驗的接種群體太小,不能滿足正常試驗的進行。為盡快篩選出合適的培養(yǎng)基配方及相應的培養(yǎng)條件,筆者結合雜交育種,采用雜交種子試管發(fā)芽的方法,再用試管實生苗的上胚軸為外植體進行研究,取得了事半功倍的效果。筆者發(fā)現(xiàn),杜鵑花的雜種實生苗常規(guī)播種繁殖需3至5年才能開花,而經上胚軸培養(yǎng)的雜種實生苗,移栽后第二年即可開花,大大縮短了雜種實生苗的童期,對加快顯花、結果類植物的育種進程具有重要意義。
      一般來說,種子的滅菌處理較其他器官或組織容易得多。杜鵑花雜交種子的滅菌處理為:70%酒精表面浸泡1分鐘,滅菌水漂洗后轉0.1%升汞液浸泡10分鐘,滅菌水漂洗3次,每次1分鐘以上。滅菌后再剖實取籽、接種培養(yǎng),接種兩周始見發(fā)芽。出苗后取用上胚軸進行誘芽快繁,繁殖系數(shù)較高。成苗后,可取莖尖或莖節(jié)再培養(yǎng),培養(yǎng)條件和方法同前。國內組織培養(yǎng)涉及新品種選育的不多,特別是在觀賞園藝植物方面。從發(fā)展的角度看,組培技術要保持較強的生命力,就不該離開新品種的選育。因此,有機地將組培技術與杜鵑花新品種選育結合起來,對提高綠地植物景觀的建設水平、促進杜鵑花的產業(yè)化發(fā)展,都是十分有益的。

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